嗜水气单胞菌鞭毛蛋白的纯化及重组蛋白FlaB多抗的制备

【摘要】嗜水气单胞菌（Aeromonashydrophila）属于弧菌科、气单胞菌属，广泛存在于水体环境中，能够感染多种水生和陆生动物，是一种重要的人-兽-鱼共患的细菌病原菌。嗜水气单胞菌可以使淡水鱼类发生疖病和败血症，给水产养殖业带来了严重危害。人感染致病性嗜水气单胞菌后会发生腹泻、食物中毒、继发感染的临床症状，严重威胁到人类公共卫生安全。鞭毛是嗜水气单胞菌的一个特殊结构。鞭毛在细菌的运动方面有着重要作用，它使菌朝着更加有利的环境运动或者避开不利的外界条件，增强与其他微生物的竞争能力。此外，鞭毛在黏附、生物膜形成以及病原菌定植中起关键作用，是一种重要的毒力因子。本研究提取和纯化了嗜水气单胞菌天然鞭毛蛋白，透射电镜初步观察鉴定了鞭毛的形态，SDS-PAGE结果显示，纯化的鞭毛蛋白在40kDa处有一条蛋白带。并用天然鞭毛蛋白免疫了鲫鱼，纯化鲫鱼免疫后血清中的IgM，制备了HRP标记的兔抗鱼免疫球蛋白抗体，为鱼类血清学检测提供了工具。另外，根据GenBank上已经公布的基因序列设计引物，成功克隆了嗜水气单胞菌鞭毛flaB基因，序列长度为912bp。双酶切后构建了重组表达载体30a-flaB，并在表达宿主菌E.coliBL21(DE3)中有效表达，得到了大小为38kDa的带有His-tag的重组蛋白。Western-blot实验证实了此蛋白即为目的蛋白。用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔，制备了多克隆抗体。间接ELISA测定血清效价。Western-blot实验结果表明，兔抗FlaB血清不仅能与重组蛋白反应，而且还可以与天然的嗜水气单胞菌鞭毛蛋白发生反应，提示该鞭毛蛋白FlaB可能是嗜水气单胞菌的重要保护性抗原之一，为下一步进行FlaB蛋白免疫原性研究及其疫苗的制备奠定了基础。
【作者】沈雪飞；
【导师】卢强；
【作者基本信息】吉林大学，兽医，2014，硕士
【关键词】嗜水气单胞菌；鞭毛；毒力因子；黏附；免疫原性；

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